EasySeq 16S Microbiome Kit 96 rxn

EasySeq 16S Microbiome Library Prep Kit permite realizar perfiles microbiológicos mediante secuenciación de nueva generación (NGS) con un flujo de trabajo optimizado en un solo tubo usando Reverse Complement PCR (RC-PCR). El kit está orientado a la amplificación de las regiones hipervariables V3–V4 del gen 16S rRNA para apoyar la clasificación taxonómica y el análisis de diversidad microbiana. 🧬🔬

Uso previsto

• Preparación de bibliotecas NGS para estudios de microbioma basados en 16S rRNA (regiones V3–V4).
• Solo para uso en investigación (For Research Use Only).
• Amplificación directa de ADN extraído de múltiples tipos de muestra sin necesidad de cultivo bacteriano (ambientales, alimentos, humanas y de origen animal).

Tecnología RC-PCR y flujo de trabajo

• Flujo cerrado en un solo tubo y una sola reacción: amplificación del objetivo, adición de adaptadores de secuenciación e indexación UDI ocurren simultáneamente. ⚙️✅
• Menos pasos manuales para reducir riesgo de errores de pipeteo, intercambio de muestras y contaminación cruzada.
• Después del PCR, las muestras pueden poolerse para limpieza en un solo tubo con beads magnéticas (se recomiendan AMPure XP o AmpliClean).

Especificaciones del ensayo

• Ensayo singleplex para V3–V4 con un amplicón.
• Requerimiento de ADN de entrada: mayor o igual a 5 pg.
• Se reporta generación de datos NGS con muy pocas lecturas quiméricas, dependiendo del número de ciclos de PCR.

Compatibilidad y multiplexación

• Compatible con Illumina MiSeq y NextSeq 1000/2000 (según plataforma y kit de reactivos).
• Multiplexación teórica de hasta 768 muestras (según plataforma y disponibilidad de índices).
• El documento menciona disponibilidad futura para secuenciación Nanopore en tiempo real y lectura larga.

Ventajas operativas

• Reacción en un solo tubo para simplificar el flujo de trabajo. ✅
• Riesgo mínimo de contaminación y errores.
• La cinética RC-PCR mejora especificidad y sensibilidad al sintetizar primers durante la reacción.
• Uso de primers phase-shifted para reducir el spike-in de PhiX y maximizar capacidad de la celda de flujo.
• Placas UDI premarcadas y separables para optimizar uso y reducir residuos (placas de índices se ordenan por separado). 📦

Contenido y consumibles relacionados

• Incluye Probe Panel específico del objetivo y RC-PCR Master Mix (PCR Master Mix, 96 reacciones).
• Requiere placas de índices UDI (IDX) para completar el flujo de trabajo; se indican como orden separada.
• Para limpieza de bibliotecas: beads magnéticas (AmpliClean como alternativa tipo AMPure XP) se indican como orden separada.

Notas de análisis

• Tras secuenciación y demultiplexing, se recomienda remover secuencias de primers antes del análisis bioinformático.